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LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent(低毒款)
  • 产品货号:
    BN17002
  • 中文名称:
    LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent(低毒款)
  • 英文名称:
    LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN17002-0.75 mL

    0.75 mL

    ¥1500.00

  • BN17002-1.5 mL

    1.5 mL

    ¥2500.00

产品描述

储存条件 4℃保存,一年有效(避免冷冻)。

产品介绍 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一种非 常高效的新型转染试剂,细胞毒性更低,转染效果更佳,达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸转染 到真核细胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 对于常见的 哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、 无明显的细胞毒性,并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂的 使用方法和常用的 Lipofectamine®2000 Reagent 完全一致, 转染效率比 Lipofectamine® 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不 仅适用于质粒、siRNA 等单一成分的细胞转染,也适合多个 质粒或者质粒与 siRNA 等的组合转染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转 染过表达质粒后,通常 24-48 h 后达到较高的蛋白表达水平, 并且很多情况下蛋白表达量在转染后 48 h 显著高于转染后 24 h;转染 siRNA 通常 3-5 天后对于目的基因的下调水平会 比较理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂转 染细胞时,基本不受细胞培养液中血清影响,即可以在血清存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果, 推荐转染时使用不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液, 或者改变或添加培养基,但转染 4-6 h 后可去除转染液。

使用方法

     1. DNA 转染 下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞,至于其 他培养材料,请参考转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的 DNA(μg)与 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent(μL)的比值为 1: 2 到 1: 3, 转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒 性。优化转染是必需的(见优化质粒 DNA 转染)。 

A. 贴壁细胞:转染前一天每孔 0.5-2×105个细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基中,在转染时细胞可长至 70-90%汇合度。

悬浮细胞:在配制转染液前每孔 4-8×105 个细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基中。 

B. 转染液制备,每孔细胞用量如下:

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基(或者其他无血 清培基) 稀释质粒 DNA,轻轻混匀。 

     b. 使用前轻轻摇匀 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent , 然 后 取 适 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培养基中稀释,室温孵育 5 min。 注意:请在 25 min 内进行下一步操作。 

     c. 将前两步所稀释的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合(使总体积为 100 μL),轻轻混匀, 室温放置 20 min(溶液可出现浊)。

     注意:转染复合物常温下可在 6 h 内保持稳定。

C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液,轻轻摇匀。 

D. 37℃培养 18-48 h 后检测基因表达,转染 4-6 h 后可更换 培养基。 对于稳定转染,在转染 24 h 后以 1: 10 稀释接种于新鲜培养基中,第二天可加入选择培养基。

优化 DNA 转染 

     可通过改变细胞密度、质粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 浓度以优化转染。要保证细胞融合 在 90% 以 上 , DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之间进行调整。

2. RNAi 或 siRNA 转染 

     下列步骤适用于 24 孔板培养的哺乳动物细胞,至于其 他培养材料,请参考转染规模调整,所有数量和体积均是按 每孔计算。

A. 转染前一日,将细胞接种于 500 μL 不含抗生素的培养基 中,使其在转染时长至 30-50%汇合度。 

B. 转染液制备,每孔细胞用量如下:

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培养基(或者其他无血 清基)稀释 20 pmol siRNA(转染时 siRNA 终浓度为 33 nM), 轻轻混匀。

     b. 使用前轻轻摇匀 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent , 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培养基中稀释,室温孵育 5 min。 

     注意:请在 25 min 内进行下一步操作。 

     c. 将前两步所稀释的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合(使总体积为 100 μL),轻轻混匀, 室温放置 20 min(溶液可出现浑浊)。

C. 在每孔细胞中加入 100 μL 转染液,轻轻摇匀。37℃培养 24-96 h 后检测基因表达,转染 4-6 h 后可更换培养基。 

siRNA 转染优化

     可 调 整 siRNA 与 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以优化转染,在 24 孔板,siRNA 可在 10-50pmol 之间调整,LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之间调整,在增加细胞密度时也应优化转染 剂量。

转染规模调整 

不同培养材料转染液、细胞和培养基的用量按照培养 材料面积换算。在 96 孔板细胞高通量自动分析系统,推荐 每孔使用 50 μL 转染液。

注意:在 96 孔板,可将细胞直接接种于转染液中以实 现快速转染,直接在培养板中配制转染液 100μL,直接将细胞加入培养板中,其密度为上述方法的 2 倍,细胞在转染液中可正常贴壁。

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注意事项

1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。 

2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。 

3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养 液或普通的 DMEM 培养液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂不能 vortex 或离心,宜缓慢晃动混匀。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 转染试剂使用 后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效 率。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。